大鼠模型是生物醫(yī)學研究中重要的資源，因與人類免疫系統(tǒng)相似，而常被用于免疫相關的功能研究。然而目前小鼠模型在基礎和機制免疫學研究中占主導地位，相對缺乏對大鼠模型中免疫細胞的流式分析鑒定。本文將分享對大鼠常見免疫細胞的流式鑒定方案，鑒定分析不同組織中的粒細胞、巨噬細胞、T細胞、B細胞及NK細胞。

實驗方案1

該方案以10-12周齡Lewis大鼠的肌肉、脾臟、胸腺和腸系膜淋巴結為樣本，組織經(jīng)消化并用40μm細胞過濾器過濾后制備成單細胞懸液。

配色Pannel：

圈門邏輯：

圈門分析：

1. 側(cè)向散射(SSC)和前向散射(FSC)參數(shù)對樣本細胞進行圈門，利用FSC-H去除粘連細胞，然后進行單一細胞圈門；采用死活染料及CD45對活性良好的CD45+細胞進行下游分析；

2. 巨噬細胞：根據(jù)CD11B、CD68圈出巨噬細胞（CD11B⁺CD68⁺），再根據(jù)CD86和CD163分別圈出M1（CD86+）和M2（CD163+）型巨噬細胞；

3. 單核細胞：根據(jù)CD11B、CD43圈出單核細胞（CD11B⁺CD43⁺）；

4. 粒細胞：根據(jù)CD11B、CD43、CD62L圈出粒細胞（CD11B⁺CD43⁺CD62L^+/-SSC^hi），當粒細胞被激活時CD62L則低表達；

5. 淋巴細胞：利用TCR?δ圈出?δT細胞，接著在TCR?δ-的細胞中，進一步根據(jù)CD3劃分 T 細胞（CD3+）和非T（CD3-）淋巴細胞；

（1）T細胞：在CD3⁺T細胞中，根據(jù)CD4、CD8圈出CD4+和CD8+ T細胞;在CD4+T細胞中圈出Treg細胞（CD25+）、Th1細胞（CCR1⁺CCR5⁺）和的Th2細胞（CCR4⁺CCR8⁺）；

在CD3⁺T細胞中，在根據(jù)CD44和CD62L圈出激活性T細胞（CD44⁺CD62L^-）、記憶T細胞（CD44^hiCD62L^lo）、naive T細胞（CD44^loCD62L^hi）；

（2）B細胞：非T細胞淋巴細胞中，根據(jù)CD45R圈出B細胞（CD3^-CD45R⁺）；

（3）NK細胞：非T細胞淋巴細胞中，根據(jù)CD49b圈出NK細胞（CD3^-CD49b^-）。

實驗方案2

該方案以Sprague-Dawley大鼠的血液和肺、脾臟、肝臟、骨髓細胞為樣本。

配色Pannel:

流式結果:

圈門分析:

1. 側(cè)向散射(SSC)和前向散射(FSC)參數(shù)對樣本細胞進行圈門,去除碎片(i)，利用死活染料去除死細胞(ii)，利用FSC-H和FSC-W參數(shù)來排除粘連細胞（iii），利用CD45圈出淋巴細胞（iv）；

2. T細胞：從CD45+細胞中，圈出CD3+T細胞（v)，根據(jù)CD4、CD8圈出CD4⁺T和CD8⁺ T細胞（vi）;

3. NK細胞；從CD45+CD3-的細胞中，圈出CD161⁺His48^-細胞（vii）；

4. B細胞：從CD45+CD3-CD161-His48+/-的細胞，圈出CD45R⁺CD161^-細胞（viii）；

5. 中性粒細胞：從CD45+CD3-CD161-CD45R-的細胞中，圈出CD43⁺細胞（ix）；

6. 單核細胞：從CD45+CD3-CD161-CD45R-CD43-/lo的細胞中，利用CD43和His48的差異表達圈出兩個單核細胞亞群 ——CD43^LoHis48^Hi 和 CD43^HiHis48^Lo-Int（x）。

總結

兩個方案為大鼠常見免疫細胞的鑒定分析提供了框架，但對一些細胞群的鑒定有所差異：方案1通過CD45+CD3-CD49B+鑒定NK細胞，方案2則通過CD45+CD3-CD163-鑒定NK細胞；方案1通過CD45+CD11B+CD43+鑒定單核細胞，而方案2通過CD43和His48將單核細胞分為兩群（CD45⁺CD3^-CD161^-CD45R^-CD43^-/loCD43^LoHis48^Hi 、 CD45⁺CD3^-CD161^-CD45R^-CD43^-/loCD43^HiHis48^Lo-Int），強調(diào)了CD43和His48指標對中性粒和單核細胞鑒定中的實用性。

參考文獻：

[1]Adusei KM, Ngo TB, Alfonso AL, Lokwani R, DeStefano S, Karkanitsa M, Spathies J, Goldman SM, Dearth CL, Sadtler KN. Development of a High-Color Flow Cytometry Panel for Immunologic Analysis of Tissue Injury and Reconstruction in a Rat Model. Cells Tissues Organs. 2023;212(1):84-95.

[2]Barnett-Vanes A, Sharrock A, Birrell MA, Rankin S. A Single 9-Colour Flow Cytometric Method to Characterise Major Leukocyte Populations in the Rat: Validation in a Model of LPS-Induced Pulmonary Inflammation. PLoS One. 2016 Jan 14;11(1):e0142520.